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生化試劑盒

超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒-WST-8法
上海恒遠(yuǎn)生物從事酶聯(lián)免疫學(xué)10年有余，技術(shù)成熟，產(chǎn)品穩(wěn)定。恒遠(yuǎn)品牌自主研發(fā)ELISA試劑盒，現(xiàn)已涵蓋20多個(gè)種屬，數(shù)千種產(chǎn)品，涉及腫瘤、激素、自身免疫、心血管、代謝等十多個(gè)研究領(lǐng)域。其ELISA試劑盒不僅檢測(cè)指標(biāo)豐富，還可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求定制檢測(cè)范圍，并且提供實(shí)驗(yàn)外包與免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。歡迎您來電咨詢。
中文名稱 超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒-WST-8法
規(guī)格 96樣
貨號(hào)

A-002-SH

價(jià)格 ￥700
樣本類型 血清，血漿，組織勻漿，細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等
檢測(cè)范圍 詳見說明書
檢測(cè)方法 微板法
貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取
文獻(xiàn) 咨詢我司業(yè)務(wù)員獲取


注　意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

 

測(cè)定意義：

SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

 

測(cè)定原理：

通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)，O2-可與 WST-8 反應(yīng)產(chǎn)生水溶性染料甲臜，后者在 450nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液黃色越深，說明 SOD 活性愈低，反之活性越高。

 

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

 

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃避光保存；

試劑二：液體 150μL×1 支，4℃避光保存；

試劑三：液體 100μL×1 支，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。

 

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

 

測(cè)定步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋 50 倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水 1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入 100μL 試劑二，充分混勻。配好的試劑 4℃避光可保存一周。（若一次性測(cè)定樣本較少，可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照 20mL：0.1mL 的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用 5mL 蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

 

5、 樣本測(cè)定（在 96 孔板中依次加入下列試劑）

 

試劑名稱（μL）

測(cè)定管

對(duì)照管

樣本

10

 

蒸餾水

 

10

試劑三（稀釋后）

10

10

工作液

160

160

試劑四

20

20


充分混勻，室溫靜置 30min 后，450nm 處測(cè)定各管吸光值 A。

 

注意事項(xiàng)：

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、SOD 為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？

對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10 倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 

SOD 活性計(jì)算：

1、抑制百分率的計(jì)算

抑制百分率＝(A 對(duì)照管－A 測(cè)定管) ÷A 對(duì)照管× 100%

盡量使樣本的抑制百分率在 10-90%范圍內(nèi)。如果計(jì)算出來的抑制百分率小于 10%或大于90%，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測(cè)定。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高，則需將樣本用提取液適當(dāng)稀釋；如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測(cè)樣本。

2、SOD 酶活性單位：

3、在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為 50%時(shí)，反應(yīng)體系中的 SOD 酶活力定義為一個(gè)酶活力單位(U/mL)。

3、SOD 酶活性計(jì)算：

（1）血清（漿）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷V 樣=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)

（2）組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞 SOD 活力計(jì)算：

a.按樣本蛋白濃度計(jì)算

SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(V 樣×Cpr)

=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr需要另外測(cè)定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。

b.按樣本鮮重計(jì)算

SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(W ×V 樣÷V 樣總) =20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W

c.按細(xì)菌或細(xì)胞個(gè)數(shù)計(jì)算

SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率) ×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)

=0.04×抑制百分率÷(1－抑制百分率)

V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL；

V 樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL ；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬(wàn)。



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