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生化試劑盒

α-淀粉酶試劑盒-可見分光光度法

測定原理:

還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質。β-淀粉酶不耐熱,在70℃鈍化15min,從而定α-淀粉酶活性。

中文名稱 α-淀粉酶試劑盒
規(guī)格 24樣
貨號 E-363-SH


價格 ¥230
樣本類型 血清,血漿,組織勻漿,細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清液等
檢測范圍 詳見說明書
檢測方法 可見分光光度法
貨期 3-5天
說明書 咨詢我司業(yè)務員獲取
文獻 咨詢我司業(yè)務員獲取

    正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

淀粉酶負責水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時使淀粉的粘度降低,因此又稱為液化酶。


測定原理:

還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質。β-淀粉酶不耐熱,在70℃鈍化15min,從而定α-淀粉酶活性


自備的儀器和用品

可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、玻璃比色皿、研缽蒸餾水。


試劑的組成和配制:

試劑一:25mL×1瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需90℃加熱溶解后再用;

試劑二:20mL×1瓶,4℃保存,若有沉淀析出,需70℃加熱溶解后再用。


粗酶液提取

組織:稱取0.1~0.2g樣本(建議稱取約0.1g樣本,加1 mL蒸餾水勻漿;將勻漿倒入離心管中,在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提取;3000g,25℃離心10min,吸取上清液并且加蒸餾水定容至10 mL,搖勻,即為淀粉酶原液。

血清(漿):直接檢測。

操作步驟和加樣表(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑) 

1、 分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長到540 nm,蒸餾水調零。

2、 試劑一或試劑二40℃預熱10min

3、測定步驟

試劑(μL

對照管

測定管

α淀粉酶原液

250

250

70℃水浴15min左右,冷卻

蒸餾水

250

 

試劑二

 

250

40℃恒溫水浴中準確保溫5min

試劑一

500

500

混勻,95℃水浴5min,冷卻, 540nm處讀取對照管和測定管吸光度,計算ΔA=A測定管-A對照管。


α-淀粉酶活性計算:

1、標準條件下測定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778; x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。

2α淀粉酶活性

 

1)按照樣質量計算

單位定義:每g組織每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。

α淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(ΔA0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V÷V樣總)÷T=1.075×(ΔA0.1778)÷W

2)按照蛋白質含量計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。

α淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA0.1778)÷3.7215×V反總]÷V×Cpr)÷T=0.1075×(ΔA0.1778) ÷Cpr

3血清(漿)樣本中α淀粉酶活性計算

單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。

α淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA0.1778)÷3.7215×V反總]÷V÷T=0.1075×(ΔA0.1778) 

V反總:反應體系總體積,0.5mL;V樣:加入反應體系中樣本體積,0.25 mL;V樣總:提取液總體積,10 mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,5min。

 

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