ELISA實驗設(shè)置
ELISA實驗設(shè)置
預(yù)實驗設(shè)置
1、酶聯(lián)免疫吸附分析(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)是基于抗原和抗體的免疫反應(yīng)和酶的高效催化反應(yīng)而建立的一種生物分析技術(shù)，可用于對待測樣本中目的蛋白進(jìn)行定性、定量分析。常見的待測樣本為血清、血漿。
2、對于一個完整的 ELISA kits，內(nèi)包含所有試劑，其相應(yīng)的實驗操作直接參考說明書即可。對于第一次接觸 ELISA實驗而言，預(yù)實驗是一個不錯的選擇；而對于待測樣本而言，預(yù)實驗可以實現(xiàn)樣本的初步判斷，比如樣本是否需要稀釋等。
3、那么如何做好預(yù)實驗?zāi)兀?
3.1 首先需按說明書制備好樣本；若說明書沒提及，則需查找相應(yīng)的樣本處理方法；
3.2 所有用到的試劑要按說明書要求配制或準(zhǔn)備，預(yù)實驗一般設(shè)置2條帶（16孔），操作步驟請參考說明書，酶標(biāo)板具體設(shè)置如下：
以 Mouse Brain derived neurotrophic facor, BDNF ELISA Kit 為例，標(biāo)準(zhǔn)品OD值如下：
待測樣本為腦組織K1、M1（為隨機(jī)編號），選擇不同的稀釋倍數(shù)做預(yù)實驗，其相應(yīng)的OD如下：
通過標(biāo)準(zhǔn)品的OD及濃度值，運用Curve Expert 1.4 軟件，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下：
將不同稀釋倍數(shù)的樣本OD代入公式，即可得到相應(yīng)的待測樣本的濃度。（對于有稀釋倍數(shù)的，需要乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）。
選擇使待測樣本濃度處于曲線陡峭處，針對Mouse Brain derived neurotrophic facor, BDNF ELISA Kit檢測腦組織，可考慮原液檢測。
4、預(yù)實驗確定樣本合適的稀釋倍數(shù)，下面進(jìn)行正式實驗，排版如下，注意做好標(biāo)識，正式實驗操作步驟請參考相應(yīng)的說明書。
（注意：競爭法的稍有不同，需嚴(yán)格按照說明書操作）
